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PITC 衍生法分析 18 种氨基酸
点击次数:963 发布时间:2017-08-24

PITC 衍生法分析 18 种氨基酸

 

方法:适用于 ChP。 2015 二部中《复方氨基酸注射液中氨基酸的测定》氨基酸分析步骤

  1. 原理

这种分析氨基酸的方法基于柱前衍生步骤,衍生化反应是在碱性条件下完成的,采用异硫氰酸苯酯和游离氨基酸反应生成的 PTC-氨基酸衍生物可于 UV 254nm 处被检测到。通过 PITC 分分时时彩衍生法改善的氨基酸分离,同样使其分析更有效。

 

图 1。 PITC 氨基酸衍生原理

 

  1. 试剂

三乙胺溶液:将 1.4mL 1mol/L 三乙胺溶液和 8。6mL 乙腈混合均匀;

异硫氰酸苯酯溶液:配成 12.5μL/mL 的异硫氰酸苯酯的乙腈溶液(即 0.1mol/L;

18 种氨基酸标准溶液:溶解或稀释一定量的 18 种氨基酸于 0.1mol/L 盐酸中,配制成 0。5μmol/mL 的 18

种氨基酸标准溶液。

 

  1. 衍生化

转移 200μL 的 18 种氨基酸标准溶液(或样品溶液)入 1.5mL 塑料管中,加入 100μL 三乙胺溶液和 100μL 异硫氰酸苯酯溶液,混合,至于室温下反应 1h 后,加入 400μL 正己烷,涡旋振荡 10min。取澄清的下层液,稀释三倍后,用 0.45μm 滤膜过滤后进样。

  1. 液相色谱分析

色谱柱:ACE Excel SuperC18 5μm 250×4.6mm(货号:EXL-1211-2546U

流动相:A0。1mol/L 醋酸钠溶液(用稀醋酸调节 pH 值至 6.5-乙腈(937) B:乙腈-水(80:20)

流速:1ml/min


 

 

 

时间(min)

流动相 A%

流动相 B%

0

100

0

15

85

15

18

76

24

25

60

40

30

60

40

30。01

0

100

50

0

100

50。01

100

0

70

100

0

 

进样体积: 5μl 检测波长:254nm 柱温:36℃

 

注:这里梯度供参考,可根据仪器实际情况进行适当调整

  1. ASP,天冬氨酸;2. Glu,谷氨酸;3。 Ser,丝氨酸;4。 Gly,甘氨酸;5。 His,组氨酸;

6. Arg,精氨酸;7. Thr,苏氨酸;8。 Ala,丙氨酸;9. Pro,脯氨酸;10. Tyr,酪氨酸;

11. Val,缬氨酸;12。 Met,甲硫氨酸;13. Cys,胱氨酸;14. Ile,异亮氨酸;

15。 Leu,亮氨酸;16。 Phe,苯丙氨酸;17. Trp,色氨酸;18。 Lys,赖氨酸。

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